MDA-MB-231-luc人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

常溫細(xì)胞收貨后處理方法

1. 收到細(xì)胞后，首先觀察培養(yǎng)瓶是否完好，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)基外溢、渾濁等現(xiàn)象，請及時(shí)拍照并與我們聯(lián)系。

2. 用75%酒精對培養(yǎng)瓶表面進(jìn)行消毒處理，將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)2~4 h，以恢復(fù)細(xì)胞狀態(tài)。

3. 靜置完成后，取出培養(yǎng)瓶，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)。如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常請及時(shí)與我們聯(lián)系，如果細(xì)胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系，則默認(rèn)為收貨良好。

4. 若細(xì)胞密度超過80%，則可以根據(jù)提供的細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行傳代或凍存；若細(xì)胞密度未達(dá)到80%，收集瓶中完quan培養(yǎng)基，留6mL培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

凍存細(xì)胞收貨后處理方法

1. 收到細(xì)胞后，首先觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好，是否有解凍情況，若發(fā)現(xiàn)干冰完quan汽化或凍存管有解凍現(xiàn)象，請及時(shí)拍照并與我們聯(lián)系。如果細(xì)胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系，則默認(rèn)為收貨良好。

2. 復(fù)蘇第一管如有活性、狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系，會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第 二管。

特別說明：未與我方聯(lián)系，擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1. 復(fù)蘇細(xì)胞：從液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要復(fù)蘇的細(xì)胞，水浴鍋提前打開預(yù)熱37℃。

1) 將查找到的凍存細(xì)胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍；

2) 將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完quan培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm 離心 5min；

3) 棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完quan培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中（或6cm皿中），培養(yǎng)過夜，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2. 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次；

2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化3-5min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加5ml以上含10%血清的完quan培養(yǎng)基終止消化；

3) 輕輕吹打細(xì)胞，完quan脫落后吸出至離心管中，1000rpm離心5-8min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL完quan培養(yǎng)基后吹勻；

4) 按5-6mL/瓶補(bǔ)加完quan培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含5-6 mL完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中。

（即1個(gè)T25傳代接種至2~3個(gè)T25或者2~3個(gè)直徑為6cm的培養(yǎng)皿）

3. 細(xì)胞凍存：細(xì)胞收集參照傳代步驟1~2，按凍存數(shù)量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱過夜，后續(xù)可轉(zhuǎn)入液氮罐中長期保存。

關(guān)于細(xì)胞株售后服務(wù)

一、細(xì)胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2、3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

二、細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。