ATCC細胞株在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。ATCC細胞株一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細胞成單個細胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察ATCC細胞株直到細胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細胞成團，消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化，ATCC細胞株脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養基中止消化，血清中某些蛋白質能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果細胞需要無血清或者低血清的培養基，可以以125000g 轉速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養基，加入適合的新的培養基輕輕混勻細胞，移入到新的培養瓶。傳代的比例視細胞類型而定，
ATCC細胞株一般是1:2-1:20，具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產生損傷，對于這種類型的細胞，可用細胞刮輕輕刮下細胞，加入適量的培養基，輕輕吹打混勻細胞，然后進行傳代培養。
ATCC細胞株的污染鑒定、預防和處理問題。
普通微生物污染：培養基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規定棄用并全面嚴格滅菌。
支原體污染：顯微鏡無法觀察，依經驗表現為細胞生長緩慢，有細胞漂浮等等，應通過PCR 等方法鑒定，如發現支原體污染，ATCC細胞株應按規定棄用，實驗室要及時全面消毒滅菌，防止蔓延。（有些常規性細胞學實驗不受支原體污染影響，可以繼續使用細胞傳代，為防污染擴大蔓延，可以選擇性的在培養基中加入價的其它種抗生素，并在隔離實驗室操作和獨立使用一切用具與培養基等）。
了解每株ATCC細胞株可能產生的生物危害是很難的，但是強烈推薦，所有的人類和其他靈長類生物的細胞在能否預防HIV和肝炎病毒的實驗條件下操作，所有的操作必須在垂直層流超凈臺內操作（推薦生物安全柜），操作過程中產生的廢液和廢儀器都要經過清洗、酸處理等處理后才能丟棄。
